打开电脑和仪器的电源开关，待仪器电源显示power绿色状态。
双击电脑桌面上的“7500 software v2 0 5”图标，启动软件程序，单击“OK”选项，进入软件连接仪器和测试校准状态（若连接失败，则检查USB连接接口）。
点击“Advanced Setup”图标，进入高级设置Setup的Experiment Properties界面，具体设置步骤如下：
进入Setup的Plate Setup界面，设置基因（Target）及样本（Sample）：
（1）“Add New Target”和“Add New Sample”选项，添加并编辑基因名称和样品名称；
（2）“Reporter”和“Quencher”选项选择荧光基团和猝灭基团（通常选择的是FAM和none）；
（3）进行样品板排布，利用鼠标单选或拖曳以选择反应孔，然后勾选基因及样本，同时在Task选项中指定该反应孔的类型；
（4）在“Select Relative Quantitation Settings”选项中选择对照样本及内参基因。
进入Setup的Run Method界面，设定反应程序和反应体系（选择保存运行的模板，命名。下次实验使用的时候就不用再在设条件，直接点击open run method，调出你所需要做的实验的扩增条件）。
Reaction setup（反应体系设置）和Materials list（耗材清单）不需要设置。
进入Setup的Run界面，点击“Run”绿色按钮选项，根据提示保存实验文件后开始运行程序。
程序运行结束后，在左侧会出现对数图谱形式的实时的曲线图谱，若想换为线性图谱，选择log或linear，再点击右上角绿色分析按钮，样本的结果会在右边的96孔面板中出现，最后进行曲线的基线baseline跟阈值threshold设置。
点击顶端“Export”选项，导出数据。